¿Cómo puedo mantener los valores de una columna únicos en MySQL?

Desea que S.No siga siendo la clave principal y que PCID + NOMBRE DE USUARIO sean únicos, tan cerca de lo que dijo Hammerite:

ALTER TABLE MyTable
    ADD PRIMARY KEY (`S.No`),
    ADD UNIQUE KEY `PCID_USER_uk` (`PCID`, `USERNAME`);